尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养指南

一、细胞培养条件

进行VCAP细胞的培养需提供适宜的环境和条件，以确保细胞的健康生长。推荐将其培养在37℃、5% CO2的培养箱中，且使用无菌的完全培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒。接着，将细胞瓶放入超净台内进行严格的无菌操作，并静置于37℃、5% CO2培养箱3-4小时，以稳定其状态。请务必在显微镜下观察细胞的生长情况，并记录不同放大的照片（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，未提供照片则默认细胞状态良好。

在进行传代时，建议采用原瓶的完全培养基和自制的完全培养基进行对比培养，并在换液后将瓶盖略松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞的汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管，仅保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。

1. 弃去上清液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变化，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶并加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1：2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化。将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，将沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液中，混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，需在-80℃条件下存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，待冻存管中无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这是正常的，若脱落较多，可将培养液收集至离心管中进行处理。具体操作为：1000rpm离心5分钟，弃去上清，加入胰酶消化并轻轻吹打，使细胞脱落后添加完全培养基终止反应，再进行离心和重悬。

五、售后条款

1. 可重发情况

若细胞在运输过程中出现丢失、破损、培养液泄漏等问题，可进行重发。若收到细胞48小时内发现污染，需提供真实实验结果进行核实。常温或干冰运输后的细胞在特定情况下未存活，也可申请重发；相关细节及实验数据需提供给技术人员进行判定。

2. 不予重发情况

若因客户操作不当、使用非推荐培养体系、未能提供细胞状态照片等原因导致细胞问题，则不予重发。对于具体情况将根据实际判断处理。

以上为尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养的详细说明，确保在操作中严格遵循，以获得最佳的实验结果。