实验的原理在于细菌芽胞具有厚实而致密的细胞壁，导致其透性低，不易被染色。常规染色方法通常只能使细菌体染色，而使芽胞保持无色透明。因此，芽胞染色法是基于其难以染色但一旦染上色后又难以脱色的特性而设计的。所有的芽胞染色法都遵循相同的原则：除了使用着色力强的染料外，还需加热以促进芽胞的染色。当对芽胞进行染色时，菌体也会被染色，经过水洗后，芽胞的颜色不易流出，而菌体则会脱色。接着，使用对比度强的染料对菌体进行复染，使其与芽胞呈现不同的颜色，从而清晰显示芽胞，便于观察。

实验器材包括:

1. 活材料：培养36小时的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或枯草杆菌（Bacillus subtilis）。

2. 染色液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液。

3. 器材：小试管（75mm×10mm）、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。

实验方法如下：

1. 改良的Schaeffer和Fulton氏染色法：

(1) 制备菌液：在小试管中添加1-2滴无菌水，用接种环从斜面挑取2-3环的菌体，充分搅拌，制成浓稠的菌液。

(2) 加染色液：在小试管中加2-3滴5%孔雀绿水溶液，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。

(3) 加热：将此试管浸入沸水浴中（约15-20分钟）。

(4) 涂片：用接种环从试管底部挑取数环菌液于洁净的载玻片上制成涂面，晾干。

(5) 固定：将涂片在酒精灯火焰上固定3次。

(6) 脱色：用水冲洗直至流出的水中无孔雀绿颜色为止。

(7) 复染：用蕃红水溶液染色5分钟，倾去染色液，无需水洗，直接用吸水纸吸干。

(8) 镜检：先使用低倍，再使用高倍显微镜，最后用油镜观察。

结果：芽胞呈绿色，芽孢囊和菌体为红色。

2. Schaeffer与Fulton氏染色法：

(1) 涂片：按常规方法将待检细菌制成涂片。

(2) 晾干并固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2-3次。

(3) 染色：① 加染色液：在涂片处加入5%孔雀绿水溶液，确保染料铺满涂片，然后将涂片放在铜板上加热至染液冒蒸汽时开始计时，持续15-20分钟。在加热过程中需随时添加染色液，避免标本干涸。（切记加热温度不能过高）

② 待玻片冷却后，用水轻轻冲洗，直到流出的水中无染色液。

③ 用蕃红液染色5分钟。

(4) 水洗、晾干或吸干。

(5) 镜检：先使用低倍，再使用高倍显微镜观察芽胞和菌体的形态。

结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。

注意事项：

1. 用于芽胞染色的菌种应控制菌龄。

2. 改良法在节约染料、简化操作及提高标本质量方面优于常规涂片法，建议优先使用。

3. 在使用改良法时，为确保涂片质量，需提前制备浓稠的菌液，并在取染色的菌液时，先用接种环充分搅拌，以免菌体沉于管底，导致涂片时菌体不足。

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